產(chǎn)品詳情介紹
本產(chǎn)品包含牛痘病毒加帽酶、mRNA帽結(jié)構(gòu)2’-O-甲基轉(zhuǎn)移酶和其他加帽反應(yīng)組分，可用于對T7體外轉(zhuǎn)錄(JT101)產(chǎn)生的RNA進(jìn)行5’加帽修飾。
真核生物中，轉(zhuǎn)錄形成原始mRNA后需要在5'端形成一個特殊的帽子結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)對于mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)(出核)、翻譯過程均有重要作用。通過加帽酶的酶促反應(yīng)對RNA的5’端進(jìn)行加帽修飾是一種簡單有效的方法：牛痘病毒加帽酶 (Vaccinia Capping Enzyme)能夠?qū)?-甲基鳥苷酸帽子 (m7Gppp，Cap0)連接至RNA 5’端，形成m7Gppp5’N-mRNA (Cap0-mRNA)；mRNA帽結(jié)構(gòu)2’-O-甲基轉(zhuǎn)移酶 (mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase)以Cap0-mRNA為底物，以SAM (S-腺苷甲硫氨酸)作為甲基供體將Cap0-mRNA 5’端緊鄰帽結(jié)構(gòu)的第一個核苷酸的2'-OH甲基化，形成Cap1-mRNA。Cap1結(jié)構(gòu)能夠提高mRNA穩(wěn)定性，有助于增強(qiáng)其細(xì)胞轉(zhuǎn)染和顯微注射實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)能力。
本產(chǎn)品通過在加帽反應(yīng)中同時使用牛痘病毒加帽酶和mRNA Cap-2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶，使得加帽反應(yīng)可以在同一體系中完成，反應(yīng)產(chǎn)物為Cap1-mRNA，加帽效率可接近100%，并且帽子結(jié)構(gòu)方向正確。
熒光鏡檢和流式細(xì)胞分選結(jié)果表明,TransGen產(chǎn)品加帽修飾的mRNA轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后的表達(dá)效率顯著高于Company N產(chǎn)品。
熒光鏡檢和流式細(xì)胞分選結(jié)果表明，利用TransGen mRNA體外合成系列產(chǎn)品(LC101)合成的mRNA毒性低、穩(wěn)定性好、翻譯效率高，在不同類型的哺乳動物細(xì)胞中成功且穩(wěn)定表達(dá)。
